ELISA競爭抑制法基本操作問題分析
ELISA試劑盒SCI文章兩對半使用elisa方法,其中HBSAg、HBsAb、HBeAg使用雙抗原/抗體夾心法檢測,而HBcAb、HBeAb使用競爭抑制法檢測。 而競爭抑制法的原理:酶標抗體與樣本抗體在同樣的體系中,與固相抗原競爭結合是等比關系。原論上講,應該先將樣本與酶標抗體先行混勻,然后加入反應也進行。但實際工作中并非如此,都是分開加入反應孔。這樣會造成先加入的先結合,與后加入者并不是公平的關系,因而也不符合等比原則。特別是在放置時間長,且溫度高的情況下,對結果有很大的影響。
將陰性標本94份并用生理鹽水進行1:30稀釋,ELISA試劑盒SCI文章在加入標本后按下表時間放置后再加入酶標抗體,然后檢測結果如下:
放置時間(min)陰性標本數臨界值-標本A450nm值假陽性率(%)<0.30.3~0.7>0.70751036026813767.4565158610.6105616121020.2203818172139.3302112184357.4
ELISA試劑盒SCI文章從上表可以看出,如果同時加入標本與酶標抗體,沒出現假陽性現象。2分鐘后再加入酶標抗體,由于標本比酶標抗體先結合了兩分鐘,因此出現了7.4%的假陽性。30分鐘后再加,假陽性高達57.4%。因此建議競爭抑制法的項目,加十個樣本后立即加酶標抗體,這樣對檢測結果沒有影響。